Molecular diagnosis of avian viruses in grassland passerines and captive yellow cardinals Gubernatrix cristata in Brazil

ABSTRACT: Avian influenza viruses (AIVs), Newcastle disease virus (NDV), West Nile virus (WNV), adenovirus (AV) and herpesvirus (HV) play an important role in the health of human and animal populations. However, knowledge of the prevalence of these viruses in wild birds is restricted to some groups (e.g. shorebirds) or regions worldwide. Information on grassland birds of South America, which is essential for their conservation, is scarce. The objectives of the present study were to evaluate occurrences of AIV, NDV, WNV, AV and HV for the first time in a bird community of a unique protected area in southern Brazil, which is home for the critically endangered yellow cardinal (Gubernatrix cristata), and captive yellow cardinals from fauna maintainers of the Brazilian Captive Program of the Yellow Cardinal. Passerine species of wild life were caught, identified and samples (swabs) were collected from the oropharynx and cloaca of 64 passerines of 26 species (including 3 yellow cardinals) and 30 yellow cardinals of captive, for molecular diagnosis. The samples were subjected to RNA and DNA extraction and the real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) for AIV, NDV and WNV and nested PCR for AV and HV. One yellow cardinal of captive presented a positive result for AV, this result is important for planning, managing natural attributes and making decisions in relation to integrated conservation of threatened species. This is the first report of AV in yellow cardinal and epidemiological investigation of viruses in wild passerines of the Pampa biome, in Rio Grande do Sul, Brazil.

RESUMO: Os vírus da gripe aviária (VGA), vírus da doença de Newcastle (VDN), vírus do Nilo Ocidental (VNO), adenovírus (AV) e herpesvírus (HV) desempenham um papel importante na saúde das populações humana e animal. No entanto, o conhecimento da prevalência desses vírus em aves selvagens é restrito a alguns grupos (por exemplo, aves limícolas) ou regiões em todo o mundo. As informações sobre as aves campestres da América do Sul, essenciais para a sua conservação, são escassas. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ocorrência de VGA, VDN, VNO, AV e HV pela primeira vez em uma comunidade de aves de uma área única protegida no Sul do Brasil, que abriga o cardeal-amarelo (Gubernatrix cristata) criticamente ameaçado de extinção e em cardeais-amarelos de cativeiro dos mantenedores de fauna do Programa Brasileiro de Cativeiro do Cardeal-amarelo. Espécies de passeriformes silvestres foram capturadas, identificadas e amostras (swabs) foram coletadas da orofaringe e cloaca de 64 passeriformes de 26 espécies (incluindo 3 cardeais-amarelos) e 30 cardeais-amarelos de cativeiro, para diagnóstico molecular. As amostras foram submetidas à extração de RNA e DNA e à reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) para VGA, VDN e VNO e nested PCR para AV e HV. Um cardeal-amarelo de cativeiro apresentou resultado positivo para AV, este resultado é importante para o planejamento, manejo dos atributos naturais e tomada de decisões em relação à conservação integrada de espécies ameaçadas. Este é o primeiro relato de AV em cardeal-amarelo e de investigação epidemiológica de vírus em passeriformes silvestres do bioma Pampa, no Rio Grande do Sul, Brasil.

Molecular diagnosis of avian viruses in grassland passerines and captive yellow cardinals Gubernatrix cristata in Brazil / Diagnóstico molecular de vírus aviários em passeriformes campestres e cardeais-amarelos Gubernatrix cristata cativos no Brasil

Avian influenza viruses (AIVs), Newcastle disease virus (NDV), West Nile virus (WNV), adenovirus (AV) and herpesvirus (HV) play an important role in the health of human and animal populations. However, knowledge of the prevalence of these viruses in wild birds is restricted to some groups (e.g. shorebirds) or regions worldwide. Information on grassland birds of South America, which is essential for their conservation, is scarce. The objectives of the present study were to evaluate occurrences of AIV, NDV, WNV, AV and HV for the first time in a bird community of a unique protected area in southern Brazil, which is home for the critically endangered yellow cardinal (Gubernatrix cristata), and captive yellow cardinals from fauna maintainers of the Brazilian Captive Program of the Yellow Cardinal. Passerine species of wild life were caught, identified and samples (swabs) were collected from the oropharynx and cloaca of 64 passerines of 26 species (including 3 yellow cardinals) and 30 yellow cardinals of captive, for molecular diagnosis. The samples were subjected to RNA and DNA extraction and the real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) for AIV, NDV and WNV and nested PCR for AV and HV. One yellow cardinal of captive presented a positive result for AV, this result is important for planning, managing natural attributes and making decisions in relation to integrated conservation of threatened species. This is the first report of AV in yellow cardinal and epidemiological investigation of viruses in wild passerines of the Pampa biome, in Rio Grande do Sul, Brazil.(AU)

Os vírus da gripe aviária (VGA), vírus da doença de Newcastle (VDN), vírus do Nilo Ocidental (VNO), adenovírus (AV) e herpesvírus (HV) desempenham um papel importante na saúde das populações humana e animal. No entanto, o conhecimento da prevalência desses vírus em aves selvagens é restrito a alguns grupos (por exemplo, aves limícolas) ou regiões em todo o mundo. As informações sobre as aves campestres da América do Sul, essenciais para a sua conservação, são escassas. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ocorrência de VGA, VDN, VNO, AV e HV pela primeira vez em uma comunidade de aves de uma área única protegida no Sul do Brasil, que abriga o cardeal-amarelo (Gubernatrix cristata) criticamente ameaçado de extinção e em cardeais-amarelos de cativeiro dos mantenedores de fauna do Programa Brasileiro de Cativeiro do Cardeal-amarelo. Espécies de passeriformes silvestres foram capturadas, identificadas e amostras (swabs) foram coletadas da orofaringe e cloaca de 64 passeriformes de 26 espécies (incluindo 3 cardeais-amarelos) e 30 cardeais-amarelos de cativeiro, para diagnóstico molecular. As amostras foram submetidas à extração de RNA e DNA e à reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) para VGA, VDN e VNO e nested PCR para AV e HV. Um cardeal-amarelo de cativeiro apresentou resultado positivo para AV, este resultado é importante para o planejamento, manejo dos atributos naturais e tomada de decisões em relação à conservação integrada de espécies ameaçadas. Este é o primeiro relato de AV em cardeal-amarelo e de investigação epidemiológica de vírus em passeriformes silvestres do bioma Pampa, no Rio Grande do Sul, Brasil.(AU)

Serosurvey of Toxoplasma gondii, Sarcocystis sp. and Neospora caninum in geese (Anser sp.) from urban parks and captivity / Soroprevalência de Toxoplasma gondii, Sarcocystis sp. e Neospora caninum em gansos (Anser sp.) de parques urbanos e cativeiro

Abstract Geese, ducks, mallards, and swans are birds of the order Anseriformes, which are found in the wild, in zoos and parks, and raised for meat consumption. Toxoplasma gondii, Sarcocystis sp., and Neospora caninum are protozoans of several species of animals. Wild and domestic birds can serve as intermediate hosts, disseminators and potential sources of infection of these protozoa to humans through contaminated meat. The aims of this study were: (i) to perform a serological survey of T. gondii, Sarcocystis sp. and N. caninum in geese (Anser sp.) from public parks and from captivity and (ii) to compare seroprevalence between these two locations. Antibodies were detected by Immunofluorescence antibody test using the serum of 149 geese. Antibodies to Sarcocystis sp., T. gondii, and N. caninum were detected in 28.18%, 18% and 0.67% of geese, respectively; 57% of geese from urban parks and 26.53% of geese from captivity were seropositive for at least one protozoa. The results indicate environmental contamination, particularly for the occurrence of antibodies against T. gondii - a zoonosis that causes toxoplasmosis and is transmitted through oocyte ingestion. This is the first serological survey of T. gondii, Sarcocystis sp. and N. caninum in geese from urban parks in Curitiba, Brazil.

Resumo Gansos, patos, marrecos e cisnes são aves da ordem Anseriformes, encontrados em vida livre, zoológicos, parques e criados para consumo da carne. Toxoplasma gondii, Sarcocystis sp. e Neospora caninum são protozoários capazes de infectar diversas espécies animais. Aves domésticas e silvestres podem ser hospedeiras intermediárias e servir como disseminadoras e potenciais fontes de infecção para seres humanos por meio da carne. O objetivo do estudo foi 1) realizar a soroprevalência de T. gondii, Sarcocystis sp. e N. caninum em gansos (Anser sp.) provenientes de parques públicos e de um cativeiro e 2) comparar a soroprevalência entre os locais. Foi realizada sorologia de 149 Anser sp. pelo método da reação de imunofluorescência indireta. Anticorpos para Sarcocystis sp., T. gondii e N. caninum foram encontrados em 28,18%, 18%, e 0,67% dos animais, respectivamente; 57% dos gansos dos parques públicos e 26,53% dos animais cativos foram soropositivos para algum dos protozoários. A ocorrência de anticorpos para tais protozoários indica contaminação ambiental, ressaltando a alta prevalência de anticorpos para T. gondii, zoonose transmitida por ingestão dos oocistos. Sugere-se investigação da água e medidas ambientais para reduzir a contaminação dos animais e do ambiente. Este é o primeiro trabalho que avaliou sorologicamente gansos provenientes de parques urbanos de Curitiba, Paraná para T. gondii, Sarcocystis sp. e N. caninum.

Survey of pathogens in threatened wild red-tailed Amazon parrot (Amazona brasiliensis) nestlings in Rasa Island, Brazil

ABSTRACT The red-tailed Amazon parrot (Amazona brasiliensis) is a threatened species of psittacine bird that inhabit coastal regions of Brazil. In view of the threat of this species, the aim of this study was to perform a health evaluation in wild nestlings in Rasa Island, determining the prevalence of enterobacteria and infectious agents according to type of nest. Blood samples were collected from 64 birds and evaluated for antibodies of Chlamydia psittaci by commercial dot-blot ELISA. Cloacal and oropharyngeal swabs samples were collected from 23 birds from artificial wooden nests, 15 birds from PVC nests and 2 birds from natural nests for microbiological analysis. Swab samples were collected from 58 parrots for C. psittaci detection by PCR and from 50 nestlings for Avian Influenza, Newcastle Disease and West Nile viruses' detection analysis by real-time RT-PCR. Ten bacterial genera and 17 species were identified, and the most prevalent were Escherichia coli and Klebsiella oxytoca. There was no influence of the type of nest in the nestlings' microbiota. All samples tested by ELISA and PCR were negative. There is currently insufficient information available about the health of A. brasiliensis and data of this study provide a reference point for future evaluations and aid in conservation plans.

Laminar lesions in horses with systemic oxidative stress, committed by experimentally induced or naturally occurring gastrointestinal disorders / Lesões laminares em cavalos com estresse oxidativo sistêmico, acometidos por doenças gastrintestinais experimentalmente induzidas ou de ocorrência natural

Laminitis in horses can be associated with lesions in multiple organs secondary to sepsis. Twenty-one horses suffering from gastrointestinal disorders were used in the experiment; 7 horses with experimentally induced endotoxemia and intestinal ischaemia, and 14 horses suffering from naturally occurring colic syndrome. Tissue samples of lungs, liver, heart, brain, cerebellum and hoof laminar tissue were collected for histopathological and oxidative stress evaluation using nitrotyrosine and superoxide dismutase (SOD2) immunostaining. The horses were divided into two groups: the non-oxidative lesions group (NOLG), with 7 horses showing weak immunostaining in lungs, liver and kidney, and the oxidative lesions group (OLG), with 14 horses showing immunostaining indicating systemic oxidative stress in multiple organs. The horses from OLG showed increase of laminar lesions and SOD2 immunostaining in multiple organs when compared to the horses from the NOLG. No differences were found ln regard to laminar immunostaining by nitrotyrosine and SOD2 between experimental groups. It was concluded that systemic oxidative stress can be associated with the development of laminar lesions, and that the laminar tissue does not respond to oxidative stress with increase of SOD as occurs in other organs.(AU)

A laminite em equinos pode estar associada à lesão em múltiplos órgãos secundária a sepse. Foram utilizados 21 cavalos com afecções gastrintestinais, sendo sete com endotoxemia e isquemia intestinal induzidos experimentalmente, e 14 cavalos com síndrome cólica de origem natural. Amostras teciduais de pulmão, rim, fígado, coração, cérebro e cerebelo e de tecido laminar do casco foram coletadas para avaliação de lesão histopatológica e estresse oxidativo, pela imunomarcação de nitrotirosina e superóxido dismutase (SOD2). Os animais foram divididos em dois grupos: grupo sem lesão oxidativa (NOLG), com sete cavalos com fraca imunomarcação em pulmão, fígado e rim, e grupo lesão oxidativa (OLG), contendo 14 cavalos com imunomarcação indicando estresse oxidativo em múltiplos órgãos. Os cavalos do grupo OLG apresentaram aumento de lesões laminares e imunomarcação para SOD2 em múltiplos órgãos, quando comparados ao NOLG. Não houve diferença sobre a imunomarcação laminar para nitrotirosina e SOD2 entre os grupos experimentais. Conclui-se que o estresse oxidativo sistêmico está associado ao desenvolvimento de lesões laminares, e que o tecido laminar não responde ao estresse oxidativo com aumento de SOD como ocorre nos outros órgãos.(AU)

Anticoagulants on yield of bone marrow-derived mononuclear cells harvested from dogs / Anticoagulantes no rendimento de células mononucleares da medula óssea de cães

Cell therapy with bone marrow-derived mononuclear cells is an alternative to therapy with mesenchymal stem cell cultures. The aim of the present research was the comparison of the yield of bone marrow-derived mononuclear cells harvested from dogs with two different anticoagulants. Bone marrow was harvested from the iliac crest of five healthy dogs aged between 15 and 30 months, and the effect of two anticoagulant solutions, CPDA-1 (citrate phosphate dextrose adenine-1) and heparin, on the isolation of mononuclear cells was compared. Mononuclear cells were isolated in a density gradient and stained for CD9 and CD44 for characterization by flow cytometry. Means were compared using Student's paired t-test. Samples harvested with CPDA-1 yielded an average of 5.16x106 (±1.76x106) to 20.20x106 (±1.55x106) mononuclear cells/mL, whereas the yield of samples harvested with heparin varied between 4.56x106(±0.69x106) and 24.30x106 (±2.12x106) mononuclear cells mL-1. By flow cytometry, mean percentage of double-stained cells varied from 1.96% (±0.64%) to 5.01% (±0.73%) for CPDA-1 and from 2.23% (±0.70%) to 7.27% (±0.97%) for heparin. No significant statistical differences were observed on yield or CD9 and CD44 expression. Further studies are recommended to assess efficacy of CPDA on mononuclear cell isolation.

A terapia com células mononucleares de medula óssea é uma alternativa ao cultivo de células-tronco mesenquimais. O objetivo deste trabalho foi comparar o rendimento de células mononucleares derivadas da medula óssea de cães, colhidas com dois anticoagulantes diferentes. Foram coletadas medulas ósseas de cinco cães hígidos, com idades variando entre 15 e 30 meses, por punção na crista ilíaca. Foi comparado o efeito da solução anticoagulante no isolamento das células mononucleares, utilizando-se CPDA-1 (citrato, fosfato, dextrose, adenina) ou heparina como soluções anticoagulantes. As células mononucleares foram isoladas em gradiente de densidade e caracterizadas fenotipicamente em citometria de fluxo. Os resultados foram submetidos ao Teste t pareado para comparação de médias. Nas amostras coletadas com CPDA-1, o rendimento médio variou entre 5,16 x 106 (±1,76x106) a 20,20x106 (±1,55x106) células mononucleares mL-1, enquanto que, nas amostras coletadas com heparina, o rendimento variou entre 4,56x106 (±0,69x106) a 24,30x106(±2,12x106) células mononucleares/mL. Na citometria de fluxo, a média de células duplo-marcadas variou de 1,96% (±0,64%) a 5,01% (±0,73%) para CPDA-1 e de 2,23% (±0,70%) a 7,27% (±0,97%) para heparina. Não foram observadas diferenças estatísticas no rendimento ou na expressão de CD9 e CD44. Recomendam-se estudos adicionais para avaliar melhor a eficácia do CPDA no isolamento de células mononucleares.

Clinical, hematological, total plasma protein and fibrinogen parameters of magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) pre- and post-rehabilitation / Parâmetros clínicos, hematológicos, de proteína plasmática total e fibrinogênio em pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus) pré e pós-reabilitação

Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) usually arrive in poor body conditions at Brazilian beaches during the winter. Hematology provides valuable information about clinical and immunity status of the animals. The aims of this study were to determine the hematologic, total plasma protein (TPP) and fibrinogen profiles of young and adult magellanic penguins in PROAMAR and CETAS-SC, relating these results with the state of health and survival possibility of the animals. In Paraná 14 animals were evaluated in pre and eight in post-rehabilitation and 29 animals were evaluated in Santa Catarina after rehabilitation. Before rehabilitation, all animals showed weakness. In hematological exams of these animals, we found that anemia was present in 83% of the penguins that died and 50% of those which survived. The heterophils/lymphocytes (H/L) ratio was 3.87±0.57 in animals that died, significantly higher than the average of 2.20±0.30 for animals that survived. These two parameters are useful to assess the survival possibility of animals to rehabilitation. The body condition score was positively correlated with hematocrit and TPP, and negatively correlated with H/L ratio. After rehabilitation, the values were similar to other animals of the family Spheniscidae, with averages ranging from 1.64 to 1.90x106 erythrocytes/µL; 43.38 to 48.80% of hematocrit; 12.45 to 13.52g/dL of hemoglobin; 8,684 to 14,011 leukocytes/µL; 4,767 to 8,041 heterophils/µL; 3,215 to 4,951 lymphocytes/µL; 95 to 655 eosinophils/µl; 179.8 to 277.9 monocytes/µL; 141 to 184.9 basophils/µL; and 1.26 to 1.74 of H/L ratio. These parameters can therefore be used as reference values and release parameters for young and adult Magellanic penguins in captivity on the rehabilitation centers.(AU)

Pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus) geralmente chegam debilitados às praias do Brasil durante o inverno. A hematologia fornece informações valiosas sobre estado clínico e imunidade dos animais. Os objetivos do presente estudo foram determinar o perfil hematológico, de proteína plasmática total (PPT) e fibrinogênio de pinguins-de-magalhães jovens e adultos no PROAMAR e no CETAS-SC, relacionando esses resultados com o estado de saúde e possibilidade de sobrevivência dos animais. Foram avaliados no Paraná 14 animais na pré e oito na pós-reabilitação e 29 animais em Santa Catarina após a reabilitação. Antes da reabilitação, todos os animais apresentavam debilidade. Nos exames hematológicos desses animais, observou-se que a anemia estava presente em 83% dos pinguins que foram a óbito e em 50% dos que sobreviveram. A relação heterófilos/linfócitos (H/L) foi de 3,87±0,57 nos animais que foram a óbito, significativamente maior que a média de 2,20±0,30 dos animais que sobreviveram. Esses dois parâmetros são úteis na avaliação da possibilidade de sobrevivência dos animais à reabilitação. O escore corporal apresentou correlação positiva com hematócrito e PPT, e correlação negativa com relação H/L. Após a reabilitação os valores foram semelhantes aos de outros animais da família Spheniscidae, com médias variando de 1,64 a 1,90 x106 eritrócitos/µL; 43,38 a 48,80% de hematócrito; 12,45 a 13,52g/dL de hemoglobina; 8.684 a 14.011 leucócitos/µL; 4.767 a 8.041 heterófilos/µL; 3.215 a 4.951 linfócitos/µL; 95 a 655 eosinófilos/µL; 179,8 a 277,9 monócitos/µL; 141 a 184,9 basófilos/µL; e 1,26 a 1,74 de relação H/L. Esses parâmetros, portanto, podem ser utilizados como valores de referência e parâmetros para soltura para pinguins-de-magalhães jovens e adultos em cativeiro nos centros de reabilitação.(AU)

Concordância na detecção de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum no sangue e no leite bovino pela reação de imunofluorescência indireta / Agreement in detection of antibodies against Toxoplasma gondii and Neospora caninum in blood and milk of cattle by indirect fluorescent antibody test

O objetivo deste estudo foi avaliar a aplicabilidade da pesquisa de anticorpos anti- Toxoplasma gondii e anti- Neospora caninum em amostras de leite bovino pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e sua concordância com a detecção desses anticorpos em amostras de soro sanguíneo, simultaneamente coletadas das mesmas vacas. No total, foram analisadas amostras correspondentes de soro sanguíneo e de leite de 177 vacas em início de lactação. Para o T. gondii, o diagnóstico no leite demonstrou concordância boa e sensibilidade baixa, quando comparado ao soro sanguíneo com título de anticorpos séricos ≥64 (ponto de corte). Quanto ao N. caninum, obteve-se concordância excelente entre a detecção de anticorpos no soro sanguíneo com título ≥50 (considerado ponto de corte para termos de diagnóstico) e no leite, com sensibilidade de 80,7% e especificidade de 100%, no entanto, para as vacas com títulos de anticorpos ≥100 no soro sanguíneo, a sensibilidade e a especificidade foram de 100%. Nas condições do presente estudo, demonstrou-se que a RIFI não é indicada para diagnóstico da toxoplasmose em amostras de leite bovino, devido ao alto percentual de vacas soropositivas para anticorpos anti-T. gondii no soro sanguíneo diluído 1:64, em cujas amostras de leite não houve detecção desses anticorpos. Por outro lado, a RIFI é um teste viável para o diagnóstico da neosporose bovina, especialmente considerando como ponto de corte um título de anticorpos séricos ≥100, podendo ser recomendável pela praticidade de coleta da amostra como parte de programas de saúde dos rebanhos e estudos epidemiológicos.

This study aimed to evaluate: the applicability search for anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in cattle milk samples by indirect fluorescent antibody test (IFAT), and their concordance with detection of the same antibodies in blood serum samples, simultaneously collected from the same cows. A total of 177 cows in the beginning of lactation provided corresponding samples of blood serum and milk. To T. gondii, milk diagnosis demonstrated good conformity and low sensitivity in comparison with blood samples whose serum antibody titer ranged ≥64 (cut-off point). As for N. caninum it was obtained optimum conformity between the detection of blood serum antibodies, with titer ranging ≥50 (diagnose-aimed cut-off point) and milk, with sensitivity reaching 80.7% and 100% specificity. However, sensitivity and specificity reached 100% for cows whose antibodies titers in blood serum ranged ≥100. The study was able to demonstrate that IFAT is not indicate to diagnose toxoplasmosis in cattle milk samples due to the high percentage of cows that showed seropositivity to anti-T. gondii antibodies at the 1:64 blood serum dilution, in whose blood samples there was no such antibody detection. On the other hand, IFAT is a feasible test for diagnosing cattle neosporosis, especially when cut-off point is a serum antibody titer ≥100. It can be recommended as part of herd health programs and epidemiologic studies due to sampling practicality.

Morphology and morphometry of feline bone marrow-derived mesenchymal stem cells in culture / Morfologia e morfometria das células-tronco mesenquimais isoladas de medula óssea de gato

Mesenchymal stem cells (MSC) are increasingly being proposed as a therapeutic option for treatment of a variety of different diseases in human and veterinary medicine. Stem cells have been isolated from feline bone marrow, however, very few data exist about the morphology of these cells and no data were found about the morphometry of feline bone marrow-derived MSCs (BM-MSCs). The objectives of this study were the isolation, growth evaluation, differentiation potential and characterization of feline BM-MSCs by their morphological and morphometric characteristics. in vitro differentiation assays were conducted to confirm the multipotency of feline MSC, as assessed by their ability to differentiate into three cell lineages (osteoblasts, chondrocytes, and adipocytes). To evaluate morphological and morphometric characteristics the cells are maintained in culture. Cells were observed with light microscope, with association of dyes, and they were measured at 24, 48, 72 and 120h of culture (P1 and P3). The non-parametric ANOVA test for independent samples was performed and the means were compared by Tukey's test. On average, the number of mononuclear cells obtained was 12.29 (±6.05x106) cells/mL of bone marrow. Morphologically, BM-MSCs were long and fusiforms, and squamous with abundant cytoplasm. In the morphometric study of the cells, it was observed a significant increase in average length of cells during the first passage. The cell lengths were 106.97±38.16µm and 177.91±71.61µm, respectively, at first and third passages (24 h). The cell widths were 30.79±16.75 µm and 40.18±20.46µm, respectively, at first and third passages (24 h).The nucleus length of the feline BM-MSCs at P1 increased from 16.28µm (24h) to 21.29µm (120h). However, at P3, the nucleus length was 26.35µm (24h) and 25.22µm (120h). This information could be important for future application and use of feline BM-MSCs.(AU)

As células tronco mesenquimais são utilizadas na terapia de várias doenças na medicina humana e veterinária. As células tronco foram isoladas da medula óssea de gato, entretanto, existem poucos dados referentes a morfologia e não existem informações sobre a morfometria das células tronco isoladas da medula óssea. Os objetivos do presente estudo foram o isolamento, avaliação do crescimento, potencial de diferenciação e caracterização morfológica e morfométrica das células mesenquimais de gato isoladas de medula óssea. A diferenciação in vitro foi realizada para confirmar a multipotencialidade das células mesenquimais de gato (diferenciação em osteoblastos, condrócitos, adipócitos). As células mesenquimais foram mantidas em cultivo para avaliações morfológica e morfométrica. As células foram coradas e observadas em microscopia ótica. As mensurações foram realizadas com 24, 48, 72 e 120h de cultura (primeira e terceira passagens). O teste não paramétrico ANOVA foi utilizado e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey. O número médio de células mononucleares obtido foi de 12,29 (±6,05x106) células/mL de medula óssea. As células mesenquimais são longas e fusiformes, e escamosas com citoplasma abundante. No estudo morfométrico, observou-se aumento no comprimento médio das células durante a primeira passagem. As medidas de comprimento das células foram: 106,97±38,16µm e 177,91±71,61µm, respectivamente, na primeira e terceira passagens (24 horas). As medidas de largura das células foram: 30,79±16,75 µm e 40,18±20,46 µm, respectivamente, na primeira e terceira passagens (24 horas). O comprimento do núcleo na primeira passagem aumentou de 16,28µm (24h) para 21,29µm (120h) e na terceira passagem foi de 26,35µm (24h) para 25,22µm (120h). As informações são importantes para futuras aplicações e uso da célula mesenquimal de gato.(AU)

Padronização e avaliação histológica de um modelo experimental de lesão medular / Standardization and histological evaluation of an experimental model of spinal cord injury

A lesão medular é incapacitante, irreversível e de custo econômico e social elevado. Neste estudo, objetivou-se padronizar um modelo de lesão medular, que produza paraplegia, com o uso de cateter e avaliar histologicamente a efetividade da lesão para estudos com terapia celular. Foram realizadas as lesões medulares em ratos Wistar, utilizando-se o cateter Fogarty n.3 e compressão na região toracolombar (T8-T9) durante 5 minutos. Foram estudados três grupos: grupo A, animais controle sem lesão medular; grupo B, animais submetidos à lesão, utilizando-se 50µL de compressão; grupo C, animais submetidos à lesão, utilizando-se 80µL de compressão. Foi realizada avaliação motora pela aplicação da escala BBB, antes da compressão, após recuperação anestésica, 24 e 72 horas depois da compressão e sete dias após a compressão. Após o sétimo dia da lesão, os animais foram submetidos à eutanásia, foi feita a retirada da medula espinhal, fígado e rins e realizada a análise histológica com a coloração hematoxilina-eosina. A mortalidade variou entre os grupos, com 0% no grupo A, 38,5% no B e 48% no C. Nesses dois últimos grupos, a causa da morte foi edema pulmonar neurogênico, confirmado clínica e histologicamente. As medulas espinhais histologicamente apresentaram diferentes graus de edema, congestão vascular e hemorragia, enquanto que os fígados e os rins apresentaram diferentes graus de congestão vascular e necrose. Em relação à recuperação dos movimentos, no grupo A, verificou-se 100% de escore 21; no B, 25% de escore 21; 37,5% de escore 11; e 37,5% de escore 0; enquanto, no grupo C, verificou-se 100% de escore 0. Conclui-se que o procedimento realizado utilizando-se 80µL de solução salina para preencher o balão do cateter foi mais eficiente, apesar de maior mortalidade, pois apresentou maior porcentagem de animais com lesão completa (paraplegia).

Spinal cord injury is disabling, irreversible and with high economic and social cost. This study aimed to standardize a model of spinal cord injury to induce paraplegia, with a catheter and to evaluate the effectiveness of the histological lesion for further studies with cell therapy. Cord lesions were performed in Wistar rats using the Fogarty catheter n.3 and compression in the thoracolumbar region (T8-T9) for 5 minutes. We studied three groups: A control group without spinal cord injury, B group subjected to 50?L compression injury, C group with animals subjected to 80?L compression injury. Motor evaluation was performed by applying the BBB scale, before compression, after recovery from anesthesia, 24 and 72 hours after compression and 7 days after compression. At the seventh day after injury, the animals were euthanized. The spinal cord, liver and kidneys were removed and a histological analysis was performed with hematoxylin-eosin staining. Mortality varied among groups, it was 0% in group A, 38.5% in group B and 48% in group C. In the latter two groups the cause of death was neurogenic pulmonary edema, clinically and histologically confirmed. Histologically the spinal cord showed different degrees of edema, hemorrhage and vascular congestion, while the liver and kidneys showed different degrees of vascular congestion and necrosis. Regarding movement recovery, in group A it was found a 100% score 21, in group B 25% of score 21, 37.5% score 11 and 37.5% of score zero, whereas in group C there was a 100% of score zero. It is concluded that the procedure performed using 80?L of saline to fill the balloon catheter was more efficient because, although the higher percentage of mortality, it induced a higher percentage of animals with complete injury (paraplegia).

Evaluation of the reagent test strips and microscopic examination of urine in the diagnosis of urinary tract infection in sows / Precisão da tira reagente e do exame microscópico da urina no diagnóstico de infecções do trato urinário em porcas

The diagnosis of the urinary tract infection (UTI) in sows is usually performed by using reagent test strips, since it is a fast and practical method, and capable of being done at the farm. The microscopic examination of the urine is rarely used at the farm since it is a more time consuming and difficult technique. However, there are no studies on the accuracy of those two techniques for the UTI diagnosis on this species. This study aims to assess the accuracy of the reagent test strip and the urine microscopic examination in the diagnosis of ITU in sows, comparing them with the bacteriological examination of urine. In order to select the sows for this study, a chemical reagent test strip was carried out previously and a total of 139 sows were selected, 66 sows of which showed positivity to nitrite in the reagent test strip and 73 without nitrituria. Then, the next day, a new sample collection for performing a complete urinalysis was carried out from those 139 sows, which included physical, chemical, microscopic and microbiological examination of these urine samples. The results revealed that the nitrite test of the reagent strip showed 100% of specificity and 93% of sensitivity. The specificity of the microscopic examination for bacteriuria was 82% and the sensitivity was 100%. The UTI diagnosis by using reagent strips and/or the urine sediment test is reliable if compared to the urine bacteriological examination, which makes possible the rapid diagnosis of UTI in sows at the farm.

O diagnóstico de infecção do trato urinário (ITU) em porcas geralmente é feito com o auxílio de tiras reagentes, por ser um método rápido, prático e passível de ser realizado na própria granja. O exame microscópico da urina raramente é utilizado em granjas por ser uma técnica mais demorada e trabalhosa. No entanto, não existem estudos sobre a precisão destas duas técnicas no diagnóstico de ITU nesta espécie. O objetivo deste estudo foi avaliar a precisão da tira reagente e do exame microscópico da urina no diagnóstico de ITU em porcas, comparando-os com o exame bacteriológico da urina. Para selecionar as porcas que iriam compor o estudo foi realizado um exame químico prévio com tira reagente, do qual foram selecionadas 139 porcas, 66 positivas para nitrito na tira reagente e 73 negativas. No dia seguinte foi realizada uma nova coleta de urina destas 139 porcas para realização da urinálise completa, que incluiu os exames físico, químico, microscópico e microbiológico destas amostras de urina. Os resultados demonstraram que a prova de nitrito da tira reagente apresentou 100% de especificidade e 93% de sensibilidade. A especificidade do exame microscópico para bacteriúria foi de 82% e a sensibilidade de 100%. O diagnóstico de ITU com o uso de tiras reagentes e/ou com exame microscópico da urina é confiável, quando comparado com o exame bacteriológico da urina, o que torna possível o diagnóstico rápido de ITU em porcas na granja.

Efeito do sítio de venopunção nos parâmetros hematológicos em tigre-d'água-americano, Trachemys scripta elegans / Effect of the blood collection site on the hematological parameters in red-eared slider, Trachemys scripta elegans

O objetivo do presente estudo foi realizar a comparação entre dois sítios de coleta sanguínea em 24 exemplares de tigre-d'água-americano (Trachemys scripta elegans) oriundos de um criadouro comercial, localizado no município de Antonina, litoral do Paraná, Brasil. Os animais foram submetidos a contenção física e as venopunções foram realizadas no seio supraocciptal e na veia coccígea dorsal. As amostras heparinizadas foram identificadas e refrigeradas para posterior análise laboratorial. A contagem total de eritrócitos e leucócitos foi realizada pela técnica de hemocitometria. O hematócrito (Ht) e a hemoglobina (Hb) foram determinados pelo método de microhematócrito e cianometahemoglobina, respectivamente. A proteína plasmática total (PPT) foi determinada por refratometria e a contagem diferencial de leucócitos foi realizada através da técnica de Shilling. Houve diferença significativa no número de leucócitos e no valor da proteína plasmática total, e em ambos os casos os valores encontrados nas amostras provenientes da veia coccígea dorsal foram inferiores. A diferença encontrada no número de leucócitos provavelmente foi devido à contaminação por linfa, que também justifica o menor valor na concentração da proteína plasmática total. Conclui-se que é mais indicada a venopunção no seio supraocciptal quando comparado a veia coccígea dorsal.(AU)

The aim of the present study was to compare two different blood collection sites of 24 red-eared sliders (Trachemys scripta elegans) from a commercial breeder, situated in Antonina, Paraná, Brasil. The animals were physically restrained and paired blood samples were collected from the dorsal coccygeal vein and the occipital sinus. The samples were collected in syringes containing heparin. After collection the samples were identified and refrigerated to posterior hematological analysis. Red blood cell and white blood count were performed using a hemocytometer. The packed cell volume and hemoglobin were determined by the microhematocrit method and cyanmethemoglobin method, respectively. Total plasma protein was determined by refractometry and differential leukocyte count was performed by the Shilling technique. There was a significant difference in the total white blood cell count and on the total plasma protein value, and on both cases the results found on the samples from the dorsal coccygeal vein were lower. The difference found on the white blood cell count was probably due to the lymph contamination of the samples, which also justifies the lower values of total plasma protein. In conclusion, the occipital sinus is more recommended blood collection site than the dorsal coccygeal vein.(AU)

Effects of zearalenone in prepubertal gilts / Efeitos da zearalenona em leitoas pré-púberes

Prepubertal gilts were fed with a diet containing zearalenone (ZEA) in a concentration of 0.75 mg/kg for 21 days. The effects of this mycotoxin on morphologic aspects of the reproductive tract as well as on complete blood count (CBC), serum biochemistry analysis (SBA) and humoral immune response against sheep red blood cells (SRBC) were evaluated. There was a significant increase (P<0.05) on the reproductive tract weight, vulvar area, height of the epithelial cells of endometrial glands and uterine mucosa. These results showed the ability of this nonsteroidal mycotoxin in mimicking actions of 17β estradiol at the concentration of 0.75mg/kg. No changes in weight gain, CBC, SBA parameters and humoral response against SRBC were observed.

Leitoas pré-púbere foram alimentadas com ração contendo 0,75mg/kg de zearalenona (ZEA) durante 21 dias. Os efeitos da micotoxina foram avaliados nos aspectos morfológicos do trato reprodutivo, bem como na hematologia, bioquímica séricas e resposta imune humoral contra hemácias de carneiro. Foi observado aumento significativo (P<0,05) no peso de trato reprodutivo, na área vulvar, na altura das células epiteliais das glândulas endometriais e superficiais da mucosa uterina. Estes resultados demonstraram a capacidade desta micotoxina não esteróide em mimetizar as ações do 17β estradiol na concentração de 0,75mg/kg. Entretanto, apesar das evidentes alterações nos parâmetros estudados no trato reprodutivo, não foram observadas alterações no ganho de peso, bem como nas avaliações hematológicas e bioquímicas sangüíneas e na resposta imune humoral contra hemácias de carneiro.

Frequency of antibodies against Neospora caninum in stray and domiciled dogs from urban, periurban and rural areas from Paraná State, Southern Brazil / Frequência de anticorpos contra Neospora caninum em cães errantes e domiciliados das áreas urbana, periurbana e rurais do Estado do Paraná, sul do Brasil

Antibodies to Neospora caninum were analyzed by an indirect fluorescent antibody test (IFAT), in stray and domiciled dogs from urban, periurban and rural areas from Curitiba, Paraná State, Brazil. Of the total of 556 dogs, 18.17 percent (101) were positive for N. caninum (titer 50). Frequency of antibody was 12.71 in urban, 15.73 in periurban, and 25.38 percent in rural dogs. Rural dogs had a significantly higher frequency of antibodies than urban dogs (P< 0.05). There were no significant differences between the frequencies of antibodies in urban and periurban dogs (P>0.05), and between dogs from periurban and rural areas (P>0.05). Antibodies to N. caninum were detected in 34 of 233 domiciled dogs (14.59 percent) and in 17 of 126 stray dogs (13.49 percent). No statistical differences were observed considering life-style and geographic location of origin (P>0.05). Neospora caninum is widespread among dogs from urban, periurban and rural areas of the municipal district of Curitiba, Paraná, Brazil.

Anticorpos anti-Neospora caninum foram detectados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), em cães errantes e domiciliados das áreas urbana, periurbana e rurais de Curitiba, estado do Paraná, Brasil. Do total de 556 cães, 18,17 por cento (101) foram soropositivos para N. caninum (título de 1:50). A frequência de anticorpos foi de 12,71 por cento nos cães urbanos, de 15,73 por cento nos periurbanos e de 25,38 por cento nos cães rurais. Nos cães rurais a frequência de anticorpos foi maior do que nos cães urbanos (P<0.05). Não houve diferença significativa entre as frequências de anticorpos dos cães urbanos e periurbanos (P>0,05), e dos periurbanos e rurais (P>0,05). Os anticorpos anti N. caninum foram detectados em 34 de 233 cães domiciliados (14,59 por cento) e em 17 de 126 cães errantes (13,49 por cento). Não houve diferença estatística significativa entre o tipo de criação e a origem (P>0,05). Neospora caninum está presente nos cães urbanos e periurbanos de Curitiba e nas áreas rurais do Estado do Paraná.

Frequency of antibodies against Neospora caninum in stray and domiciled dogs from urban, periurban and rural areas from Paraná State, Southern Brazil

Antibodies to Neospora caninum were analyzed by an indirect fluorescent antibody test (IFAT), in stray and domiciled dogs from urban, periurban and rural areas from Curitiba, Paraná State, Brazil. Of the total of 556 dogs, 18.17% (101) were positive for N. caninum (titer 50). Frequency of antibody was 12.71 in urban, 15.73 in periurban, and 25.38% in rural dogs. Rural dogs had a significantly higher frequency of antibodies than urban dogs (P 0.05). There were no significant differences between the frequencies of antibodies in urban and periurban dogs (P>0.05), and between dogs from periurban and rural areas (P>0.05). Antibodies to N. caninum were detected in 34 of 233 domiciled dogs (14.59%) and in 17 of 126 stray dogs (13.49%). No statistical differences were observed considering life-style and geographic location of origin (P>0.05). Neospora caninum is widespread among dogs from urban, periurban and rural areas of the municipal district of Curitiba, Paraná, Brazil.

Anticorpos anti-Neospora caninum foram detectados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), em cães errantes e domiciliados das áreas urbana, periurbana e rurais de Curitiba, estado do Paraná, Brasil. Do total de 556 cães, 18,17% (101) foram soropositivos para N. caninum (título de 1:50). A frequência de anticorpos foi de 12,71% nos cães urbanos, de 15,73% nos periurbanos e de 25,38% nos cães rurais. Nos cães rurais a frequência de anticorpos foi maior do que nos cães urbanos (P 0.05). Não houve diferença significativa entre as frequências de anticorpos dos cães urbanos e periurbanos (P>0,05), e dos periurbanos e rurais (P>0,05). Os anticorpos anti N. caninum foram detectados em 34 de 233 cães domiciliados (14,59%) e em 17 de 126 cães errantes (13,49%). Não houve diferença estatística significativa entre o tipo de criação e a origem (P>0,05). Neospora caninum está presente nos cães urbanos e periurbanos de Curitiba e nas áreas rurais do Estado do Paraná.

Pesquisa de marcadores parasitológicos e hematológicos de resistência ao parasitismo gastrintestinal em cordeiros / Study of parasitological and haematological markers of resistance to nematode parasites in lambs

O objetivo deste trabalho foi o de identificar marcadores parasitológicos e hematológicos que reflitam a habilidade de ovinos jovens em resistir ao desafio dos nematóides para uma possível seleçäo de animais resistentes à verminose gastrintestinal. Foi estudado um rebanho de 26 cordeiros. Os animais foram avaliados por um período de oito meses, através de colheitas quinzenais de fezes e de sangue. O marcador parasitológico utilizado foi a quantidade de ovos por grama de fezes (opg) e os marcadores hematológicos utilizados foram: contagem de eosinófilos, hematócrito, concentraçäo de hemoglobina, contagem total de eritrócitos e proteínas plasmáticas totais. A metodologia empregada para a seleçäo de cordeiros resistentes ou susceptíveis ao parasitismo foi a análise de cluster. Verificou-se que, para os cordeiros, antes de completarem sete meses de idade, a realizaçäo de um programa de seleçäo näo é viável, pois há uma grande variaçäo na resposta imunológica destes animais para os parâmetros estudados. Foi possível selecionar os cordeiros utilizando-se a associaçäo do opg com a contagem de eosinófilos e a série vermelha sanguínea de quatro picos de parasitismo. Foram selecionados nove cordeiros (36,0 por cento do rebanho)susceptíveis, 3(12,0 por cento do rebanho) intermediário, onze (44,0 por cento do rebanho) resistentes ao parasitismo gastrintestinal e dois cordeiros näo puderam ser selecionados (8,0 por cento do rebanho)